Identificación de Leptospira spp utilizando una técnica molecular de PCR convencional en caninos y felinos del Instituto Distrital de Protección y Bienestar Animal (IDPYBA)

Abstract

La leptospirosis es una enfermedad zoonótica reemergente con un alto impacto en la salud pública de países del trópico en vía de desarrollo. Es causada por la bacteria Gram negativa Leptospira spp, la cual cuenta con 20 géneros y 250 serovares descritos. Esta enfermedad se transmite a través de reservorios y animales infectados, como los caninos, felinos y roedores. De este modo, la población de caninos y felinos callejeros de Bogotá pueden ser un posible reservorio o ser animales clínicamente infectados, por lo tanto, el objetivo es implementar una técnica de PCR convencional para detectar Leptospira spp en caninos y felinos del Instituto Distrital de Protección y Bienestar Animal (IDPYBA)., el método de muestreo fue aleatorio y se utilizó estadística descriptiva. Se tomaron muestras de sangre completa en un tubo de 5 ml tapa roja, mediante punción de la vena yugular, las muestras fueron procesadas en el laboratorio de diagnóstico molecular de la UDCA (Universidad de Ciencias Ambientales). Posteriormente, fueron centrifugadas a 3.500 rpm durante 5 minutos, los coágulos obtenidos se almacenaron en viales y se congelaron a -70ºC. Para el diagnóstico molecular se realizó la extracción de ADN con el kit QIAamp DNA blood and tissue kit (QIAGEN, Germany), para las PCR se utilizó los primers de 16S, LipL32 y GAPDH. En los resultados, se obtuvo que 112 (56%) muestras fueron positivas a 16S y no se identificó amplicones a LipL32. Adicionalmente, 10 muestras positivas a 16S fueron seleccionadas aleatoriamente para realizar secuenciamiento Sanger en el laboratorio SSiGMol de la Universidad Nacional de Colombia; de estas se obtuvieron 4 muestras con un phred score >20 cuyas secuencias generadas fueron sometidas al GenBank, además se evidenció que hacen parte de un único clúster de Leptospira interrogans con un Bootstrap de 63 donde también se encuentran muestras provenientes de murciélagos, caninos y bovinos, procedentes de países americanos, europeos y asiáticos. En conclusión, se pudo identificar Leptospira spp en caninos y felinos por medio de la PCR con 16S y se confirmó por medio del secuenciamuento.

Leptospirosis is a re-emerging zoonotic disease with a high impact on public health in tropical developing countries. It is caused by the Gram-negative bacterium Leptospira spp, which has 20 genera and 250 serovars described. This disease is transmitted through reservoirs and infected animals, such as canines, felines and rodents. In this way, the population of street canines and felines in Bogotá can be a possible reservoir or be clinically infected animals, therefore, the objective is to implement a conventional PCR technique to detect Leptospira spp in canines and felines of the Instituto Distrital de Protección. and Animal Welfare (IDPYBA). The sampling method was random and descriptive statistics were used. Whole blood samples were taken in a 5 ml red cap tube, by puncture of the jugular vein, the samples were processed in the molecular diagnostic laboratory of the UDCA (University of Environmental Sciences). Subsequently, they were centrifuged at 3,500 rpm for 5 minutes, the clots obtained were stored in vials and frozen at -70ºC. For the molecular diagnosis, DNA extraction was performed with the QIAamp DNA blood and tissue kit (QIAGEN, Germany), for the PCR the 16S, LipL32 and GAPDH primers were used. In the results, it was obtained that 112 (56%) samples were positive to 16S and no LipL32 amplicons were identified. Additionally, 10 16S-positive samples were randomly selected for Sanger sequencing at the SSiGMol laboratory of the National University of Colombia; Of these, 4 samples were obtained with a phred score >20 whose generated sequences were submitted to GenBank, in addition it was shown that they are part of a single cluster of Leptospira interrogans with a Bootstrap of 63 where there are also samples from bats, canines and bovines. , from American, European and Asian countries. In conclusion, Leptospira spp could be identified in canines and felines by 16S PCR and confirmed by sequencing