Evaluación de la técnica ELISA indirecta empleando el antígeno recombinante rLicNTPDase-2 para el diagnóstico de Leishmania spp en caninos de Colombia - modalidad Investigación
Trabajo de grado - Pregrado
2022
Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales
La leishmaniosis canina representa un problema de salud pública de grandes magnitudes y ante la falta de métodos para el diagnóstico en el territorio nacional, el presente trabajo buscó verificar un nuevo método diagnóstico fundamentado en la proteína recombinante rLicNTPDase-2 mediante la técnica ELISA indirecta que pudiese diagnosticar caninos infectados con Leishmania spp. Inicialmente se confirmaron los sueros controles simtomáticos y asintomáticos considerando muestras de animales previamente diagnosticados por pruebas parasitológicas (control sintomático) y muestras de suero canino de animales jóvenes provenientes de zonas no endémicas (control asintomático). Así se confirmaron 24 muestras verdaderas positivas (VP) y 9 muestras verdaderas negativas (VN). Posteriormente se realizó la verificación de la prueba, empleando junto los controles, muestras de animales sintomáticos y asintomáticos, lo que permitió identificar una especificidad de 96%, sensibilidad de 81%, eficiencia de 90,6%, valor predictivo positivo de 92,8% y valor predictivo negativo de 89,6%. La verosimilitud positiva (RV+) arrojó un valor de 20, mientras que la verosimilitud negativa (RV-) fue de 0,19 lo que indica una utilidad clínica altamente relevante y buena, respectivamente. La AUC fue de 1,00, sugiriendo que la prueba presenta una adecuada capacidad discriminativa alejándose de la diagonal de referencia, lo que se confirma con la diferencia significativa (p <0,0001) entre los VP y VN a través de la prueba exacta de Fisher. La confirmación diagnostica en campo de 163 animales identificó una seropositividad de 47% y seronegatividad de 46%, donde los valores medios de D.O de muestras positivas y negativas mostraron diferencia significativa (p<0,05) por la prueba de Mann Whitney, indicando que la prueba de ELISA es capaz de identificar muestras positivas y negativas arrojando valores distintos de D.O. Lo anterior demuestra que la ELISA fundamentada en el antígeno recombinante rLicNTPDase-2 es una alternativa eficiente para el serodiagnóstico de Leishmaniosis en caninos del territorio nacional. Canine leishmaniasis represents a public health problem of great magnitude and in view of the lack of diagnostic methods in the national territory, the present work sought to verify a new diagnostic method based on the recombinant protein rLicNTPDase-2 using the indirect ELISA technique that could diagnose canine animals infected with Leishmania spp. Initially, positive, and negative control sera were confirmed by considering samples from animals previously diagnosed by parasitological tests (sintomatic control) and canine serum samples from young animals from non-endemic areas (asintomatic control). Thus, 24 true positive (VP) and 9 true negative (VN) samples were confirmed. Subsequently, the test was verified using samples from symptomatic and asymptomatic animals together with the controls, which allowed identifying a specificity of 96%, sensitivity of 81%, efficiency of 90.6%, positive predictive value of 92.8% and negative predictive value of 89.6%. The positive likelihood (RV+) yielded a value of 20, while the negative likelihood (RV-) was 0.19 indicating highly relevant and good clinical utility, respectively. The AUC was 1.00, suggesting that the test presents an adequate discriminative ability away from the reference diagonal, which is confirmed by the significant difference (p<0.0001) between the PV and NP by Fisher's exact test. The diagnostic confirmation in the field of 163 animals identified a seropositivity of 47% and seronegative of 46%, where the mean D.O. values of positive and negative samples showed significant difference (p<0.05) by the Mann Whitney test, indicating that the ELISA test can identify positive and negative samples yielding different values of D. O. This shows that ELISA can identify positive and negative samples yielding different D. O. values. O. This shows that the ELISA based on the recombinant antigen rLicNTPDase-2 is an efficient alternative for the serodiagnosis of Leishmaniasis in canines in the national territory