Evaluación de la capacidad fagocítica de macrófagos porcinos tipificados frente al patógeno Escherichia coli.
Trabajo de grado - Pregrado
2021
Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales
El complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) es un conjunto de genes que codifican glicoproteínas de superficie de membra denominadas antígenos leucocitarios, estos participan en la presentación de epítopes a las células T, permitiendo así, la activación de procesos de la respuesta inmunitaria, es por esto que el CMH juega un rol esencial frente a la respuesta de patógenos y control de la autoinmunidad. Escherichai coli, por su parte, es una bacteria de interés zoonótico de distribución mundial, potencialmente transmisiva, asociada principalmente a cuadros gastro entéricos, de forma ocasional puede ser mortal en porcinos, provocando un gran impacto económico en los sistemas de producción. La presente investigación se enfocó en evaluar la capacidad fagocítica de macrófagos porcinos tipificados para al gen DRB1 frente al patógeno de interés Escherichia coli. Se derivaron monocitos porcinos de sangre periférica a macrófagos, posteriormente, fueron infectados con E. coli y para determinar la mejor respuesta de expresión de CMH – II y de fagocitosis, se emplearon diferentes MOI, anticuerpos, tiempos de maduración e infección; luego, los datos fueron analizados empleando citometría de flujo para determinar el mejor porcentaje de expresión de CMH – II y de fagocitosis. Los resultados arrojaron una mejor expresión de complejo frente al anticuerpo porcino (SLA-Class II DR monoclonal), seguido del anticuerpo humano comercial (mouse anti human HLA DR) y luego con el anticuerpo monoclonal producido “in house” derivado de la Línea 243. Se evidenció que las condiciones más optimas de respuesta fueron un tiempo de maduración de 72 horas, 2 horas de infección y un MOI de 1:10. El presente estudio, fue sustancial a la hora de caracterizar el proceso de derivación celular, maduración e infección de macrófagos frente a E. coli, titulación de diferentes anticuerpos para el reconocimiento óptimo de CMH – II y MOI más deseable para los ensayos de fagocitosis. The major histocompatibility complex (MHC) is a set of genes that encode membrane surface glycoproteins called leukocyte antigens, these participate in the presentation of epitopes to T cells, thus allowing the activation of immune response processes. This means that MHC plays an essential role in the response of pathogens and control of autoimmunity. Escherichai coli, for its part, is a bacterium of zoonotic interest of worldwide distribution, potentially transmissible, associated mainly with gastro-enteric symptoms, occasionally it can be fatal in pigs, causing a great economic impact on production systems. The present investigation focused on evaluating the phagocytic capacity of porcine macrophages typified for the DRB1 gene against the pathogen of interest Escherichia coli. Peripheral blood porcine monocytes were derived to macrophages, subsequently, they were infected with E. coli and to determine the best response of MHC-II expression and phagocytosis, different MOIs, antibodies, maturation times and infection were used; then, the data were analyzed using flow cytometry to determine the best percentage of MHC-II expression and phagocytosis. The results showed a better expression of the complex against the porcine antibody (SLA-Class II DR monoclonal), followed by the commercial human antibody (mouse anti human HLA DR) and then with the monoclonal antibody produced "in house" derived from Line 243. It was evidenced that the most optimal response conditions were a maturation time of 72 hours, 2 hours of infection and a MOI of 1:10. The present study was substantial when it came to characterizing the process of cell bypass, maturation and infection of macrophages against E. coli, titration of different antibodies for optimal recognition of MHC-II and MOI most desirable for phagocytosis assays
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