Evaluación de la Interacción de la Proteína del Cuello de las Roptrias 2 (RON2) de Babesia bovis a Eritrocitos Bovino

Abstract

El parasito Apicomplexa, Babesia bovis, es principal agente causal de babesiosis bovina, la cual es la enfermedad de mayor importancia transmitida por artrópodos en el ganado bovino. Las vacunas disponibles en la actualidad son basadas en parásitos atenuados, lo cual dificulta su transporte y conservación, y a veces casos de reversión de virulencia pueden presentarse. En el mecanismo de invasión de parásitos Apicomplexa, como Toxoplasma y Plasmodium, la Proteína del Cuello de las Roptrias (RON2) se une a la membrana de la célula diana para ser el receptor del Antígeno de Membrana Apical (AMA-1), la cual es una interacción vital para el proceso de invasión del parasito, dándole así, propiedad de ser un potencial candidato a vacuna de subunidades. Dada la importancia de la investigación en caracterización de las interacciones proteína - célula, este estudio describe por primera vez la interacción a glóbulos rojos bovinos de la proteína RON2 de B. bovis. Para esto, se clonaron y expresaron en E. coli dos fragmentos conservados de RON2 (RON2 C y RON2 N), para así evaluar su porcentaje de unión a glóbulos rojos por medio de citometría de flujo. Ambos fragmentos recombinantes se expresaron y purificaron de manera exitosa a partir del medio heterólogo y presentaron actividad de unión a los glóbulos rojos, en mayor medida la porción carboxi-terminal de RON2. Estos hallazgos sugieren que RON2 de B. bovis interactúa con estas células y por ende posee un importante rol como proteína de invasión.

ABSTRACT The Apicomplexa parasite, Babesia bovis, is the main causal agent of bovine babesiosis, which is the most important disease transmitted by arthropods in cattle. Currently available vaccines are based on attenuated parasites, which makes their transport and storage difficult, and sometimes can cause reversion to virulence. In the invasion mechanism of Apicomplexa parasites, such as Toxoplasma and Plasmodium, Rhoptry Neck Protein (RON2) binds to the membrane of the target cell to be the receptor for Apical Membrane Antigen (AMA-1), this is a vital interaction for the invasion process of the parasite, giving it the property of being a potential candidate for a subunit-based vaccine. Given the importance of research in characterizing protein-cell interactions, this study describes for the first time the interaction of RON2 protein of B. bovis with bovine red blood cells. For this, two conserved fragments of RON2 (RON2 C and RON2 N) were cloned and expressed in E. coli, in order to evaluate their binding percentage to red blood cells by flow cytometry. Both recombinant fragments were successfully expressed in the heterologous system and showed binding activity to bovine red blood cells, predominantly the carboxy-terminal portion of RON2. These results suggested that RON2 from B. bovis interact with this type of cells and has an important role as an invasion protein.