Título de la evaluación de la capacidad de seroneutralización "in vitro" de los anticuerpos generados frente a péptidos químicamente sintetizados y modificados para el control de la fiebre aftosa en bovinos

Abstract

La Fiebre Aftosa es considerada como una de las enfermedades más importantes de los animales ungulados, es decir, bovinos, porcinos, caprinos, ovinos y bufalinos tanto domésticos como salvajes. Esta enfermedad es causada por un virus perteneciente al género Aphthovirus de la familia Picornaviridae y ha estado presente en prácticamente todo el mundo. Hoy en día, sigue afectando a más de 100 países, causando importantes pérdidas económicas. La vacunación es una de las principales herramientas probadas para manejar y hasta eliminar la enfermedad, el problema es que las vacunas comerciales usan el virus inactivado y esto puede causar respuestas alérgicas. Además, la inactivación de tales vacunas no siempre es perfecta y el patógeno puede volver a su estado virulento. El posible vertimiento del patógeno al medio ambiente, la mala estabilidad y la necesidad de una cadena de frío para conservar la vacuna, son otras desventajas significativas de las vacunas convencionales. La mayor desventaja de las vacunas convencionales es que estas son diseñadas para inmunizar al animal con cepas (serotipo) específicas. Una alternativa novedosa para resolver estos inconvenientes es diseñar una vacuna usando péptidos químicamente modificados. En este trabajo se analizó la capacidad de seroneutralización “in vitro”. de los anticuerpos producidos en animales vacunados con el candidato vacunal al enfrentar anticuerpos del suero contra los serotipos A24 Cruzeiro y O1 Campos del virus vivo. Para identificar y analizar la eficacia de los anticuerpos producidos contra la FA, se realizó la microprueba cuantitativa de neutralización viral sugerida por la OIE. Se trabajó con el suero de 23 bovinos (17 animales inmunizados con la formulación péptido + adyuvante Montanide ISA 70M, 3 animales vacunados con la vacuna convencional, 2 animales control adyuvante y 1 animal centinela). Para verificar que no existieran anticuerpos frente a los péptidos que se querían probar, se usaron los sueros obtenidos en la sangría inicial y posteriormente, se trabajó con los sueros obtenidos el día 43 post primera inmunización. Se observó que hubo una seroneutralización del 79.6% cuando los sueros fueron enfrentados al virus vivo del serotipo A24, mientras que al ser el enfrentamiento con el serotipo O1 hubo una seroneutralización menor (41.2%). Ningún animal centinela o control adyuvante tuvo títulos mayores a 1:45, y la vacuna convencional alcanzó títulos mayores de 1:6000. Estos valores indican que la prueba se realizó en condiciones ideales, que favorecieron resultados válidos. Para ser la primera formulación peptídica, la producción y neutralización de los anticuerpos generados contra el virus fue muy buena en ambos serotipos. Es importante seguir realizando estudios que aporten al conocimiento de las vacunas peptídicas. Esta técnica se usa actualmente para la formulación de la vacuna contra la malaria y en un futuro podría ser la forma más eficiente de fabricar todo tipo de vacunas. En el caso de la fiebre aftosa, es importante realizar pruebas de VNT frente a otros serotipos (C, SAT1, SAT2, SAT3 y Asia 1) para determinar si la vacuna sintética es apta para su distribución mundial.

Foot and Mouth Disease is considered one of the most important diseases of ungulates. It can affect, cattle, pigs, goats, sheep and buffaloes both domestic and wild. This disease is caused by a virus belonging to the genus Aphthovirus of the Picornaviridae family and has been present all over the world. Today, it continues to affect more than 100 countries, causing significant economic losses. Vaccination is one of the main tools tested to manage and even eliminate the disease, the problem is that commercial vaccines use the inactivated virus, and this can cause allergic reactions. In addition, the inactivation of such vaccines is not always perfect, and the pathogen can return to its virulent state. The possible liberation of the pathogen into the environment, poor stability and the need for a cold chain to preserve the vaccine are other significant disadvantages of conventional vaccines. The major problem of conventional vaccines is that they are designed to immunize the animal with specific strains (serotypes). A novel alternative to solve these problems is to design a vaccine using chemically modified peptides. In this work we analyzed the ability of "in vitro" seroneutralization. of the antibodies produced in animals vaccinated with the vaccine candidate when facing serum antibodies against serotypes A24 Cruzeiro and O1 Fields of the live virus. In order to identify and analyze the efficacy of the antibodies produced against AF, the quantitative micro neutralization test suggested by the OIE was performed. We worked with the serum of 23 cattle (17 animals immunized with the Montanide ISA 70M peptide + adjuvant formulation, 3 animals vaccinated with the conventional vaccine, 2 adjuvant control animals and 1 sentinel animal). To verify that there were no antibodies against the peptides that were to be tested, the sera obtained in the initial bleeding were used and subsequently, the sera obtained on day 43 post first immunization were worked on. It was observed that there was a 79.6% seroneutralization when the sera were confronted with the live virus of serotype A24, while being the confrontation with serotype O1 there was a minor seroneutralization (41.2%). No sentinel animal or adjuvant control had titers greater than 1:45, and the conventional vaccine reached titers greater than 1: 6000. These values indicate that the test was performed under ideal conditions, which favored valid results. To be the first peptide formulation, the production and neutralization of antibodies generated against the virus was very good in both serotypes. It is important to continue conducting studies that contribute to the knowledge of peptide vaccines. This technique is currently used for the formulation of the malaria vaccine and in the future could be the most efficient way to manufacture all types of vaccines. In the case of foot and mouth disease, it is important to perform VNT tests against other serotypes (C, SAT1, SAT2, SAT3 and Asia 1) to determine if the synthetic vaccine is suitable for worldwide distribution.