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Assessment of Pasteurella multocida a lipopolysaccharide, as an Adhesin in an in vitro model of rabbit respiratory epithelium

Gallego, Carolina; Romero, Stefany; Esquinas, Paula; Patiño, Pilar; Martínez, Nhora; Iregui, Carlos (2017)

The role of the P. multocida lipopolysaccharide (LPS) as a putative adhesin during the early stages of infection with this bacterium in the respiratory epithelium of rabbits was investigated. By light microscopy and double ...
Evaluación de la inocuidad de N-Glucosil aminoácidos sobre el epitelio respiratorio de septo nasal de conejo ex vivo

Solano Flórez, Yadira Consuelo (Facultad de Ciencias AgropecuariasMedicina Veterinaria, 2018)

El objetivo de esta investigación se basa en determinar la inocuidad de cuatro diferentes N-glucosil aminoácidos con el fin de evaluar su viabilidad y potencial como alternativa terapeùtica capaz de inhibir la adherencia ...
Evaluación del efecto del ácido hialurónico sobre las lesiones inducidas por el polisacárido de pasteurella multocida en el epitelio respiratorio del Conejo

Pérez Cuervo, César Augusto; Torres Barrantes, Angie Viviana (Bogotá : Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales, 2015Facultad de Ciencias AgropecuariasMedicina Veterinaria, 2015)

La Pasteurella multocida y su lipopolisacárido es causante de un complejo de enfermedades respiratorias agudas. P. multocida está en la capacidad de sintetizar diferentes factores de virulencia entre ellos el LPS, fimbrias, ...
Evaluación del efecto inhibitorio de N-glucosil aminoácidos sobre la adherencia ex vivo de P. multocida A al epitelio respiratorio de septo nasal de conejo

Gallego López, Carolina (Universidad de Ciencias Aplicadas y AmbientalesBogotá, 2021-12-02)

En este estudio se logró sisntetizar 6 N-glucopeptidos, los cuales llevan glucosa como carbohidrato principal acoplado a 6 aminoaciodos diferentes, mediante síntesis de Péptidos en Fase Sólida (SPPS-Fmoc/tBu) y usando el ...
Intranasal instillation of Pasteurella multocida lipopolysaccharide in rabbits causes interstitial lung damage

Patiño, Pilar; Gallego, Carolina; Martínez, Nhora; Rey, Alba Lucia; Iregui, Carlos (2022)

In order to characterize the in vivo lesions in the nasal cavities and lungs, twenty-eight rabbits were intranasally instilled with lipopolysaccharide (LPS) from P. multocida and then divided into seven groups according ...
Mecanismos de patogénesis bacteriana en procesos respiratorios: pasteurellosis

Esquinas Castillo, Paula; Iregui Castro, Carlos (Bogotá : Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales, 2007, 2007-01)

Pasteurella multocida es un patógeno multiespecies que causa serias enfermedades en animales de producción, animales silvestres, de laboratorio y en los seres huma-nos. Esta bacteria es el agente etiológico de enferme-dades, ...
The effect of carbohydrates on the adherence of Pasteurella multocida to the nasal respiratory epithelium

Gallego López, Carolina; Patiño, Pilar; Martínez, Nhora María; Iregui, Carlos Arturo (2021)

Pasteurella multocida subsp. multocida is responsible for different diseases that generate great economic losses in farm animal. The effectiveness of immunization against those bacteria are variable and the use of antibiotics ...
Ultrastructural Comparison of the Nasal Epithelia of Healthy and Naturally Affected Rabbits with Pasteurella multocida A

Esquinas, Paula; Botero, Lucía; Patiño, María del Pilar; Gallego, Carolina; Iregu, Carlos (2013)

An ultrastructural comparison between the nasal cavities of healthy rabbits and those suffering from two forms of spontaneous infection with Pasteurella multocida was undertaken. Twelve commercially produced rabbits of ...

Envíos recientes

Assessment of Pasteurella multocida a lipopolysaccharide, as an Adhesin in an in vitro model of rabbit respiratory epithelium
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Gallego, Carolina | 2017

The role of the P. multocida lipopolysaccharide (LPS) as a putative adhesin during the early stages of infection with this bacterium in the respiratory epithelium of rabbits was investigated. By light microscopy and double enzyme labeling of nasal septa tissues, the amount of bacteria attached to the respiratory epithelium and the amount of LPS present in goblet cells at different experimental times were estimated. Transmission electron microscopy (TEM) and LPS labeling with colloidal gold particles were also used to determine the exact location of LPS in the cells. Septa that were challenged with LPS of P. multocida and 30 minutes later with P. multocida showed more adherent bacteria and more severe lesions than the other treatments. Free LPS was observed in the lumen of the nasal septum, forming bilamellar structures and adhering to the cilia, microvilli, cytoplasmic membrane, and cytoplasm of epithelial ciliated and goblet cells. The above findings suggest that P. multocida LPS plays an important role in the process of bacterial adhesion and that it has the ability of being internalized into host cells. ©

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Evaluación de la inocuidad de N-Glucosil aminoácidos sobre el epitelio respiratorio de septo nasal de conejo ex vivo
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Solano Flórez, Yadira Consuelo | 2018

El objetivo de esta investigación se basa en determinar la inocuidad de cuatro diferentes N-glucosil aminoácidos con el fin de evaluar su viabilidad y potencial como alternativa terapeùtica capaz de inhibir la adherencia de Pasteurella multocida al epitelio respiratorio de conejos. Se empleó un modelo ex vivo con fetos de conejo Nueva Zelanda que fueron conservados en Medio Esencial Mínimo Eagle Dulbecco (MEM) para aplicar posteriormente y de manera individual cuatro N-glucosil aminoácido(Leu,Lys,Phe y Asp). Se evaluaron siete cambios microscópicos diferentes en los septos nasales por medio de microscopia de luz convencional (cantidad de células epiteliales, cantidad de células caliciformes, muerte celular, pérdida de cilias, brechas intercelulares, vacuolización citoplasmática e infiltrado neutrofílico) Los hallazgos de esta investigación permiten concluir que los 4 N-glucosil aminoácidos empleados no indujeron cambios microscopicos estadísticamente significativos frente al control negativo, confirmando su inocuidad y posible candidatura como opción terapéutica para inhibir la adherencia bacteriana al epitelio respiratorio.

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Evaluación del efecto del ácido hialurónico sobre las lesiones inducidas por el polisacárido de pasteurella multocida en el epitelio respiratorio del Conejo
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Pérez Cuervo, César Augusto | 2015

La Pasteurella multocida y su lipopolisacárido es causante de un complejo de enfermedades respiratorias agudas. P. multocida está en la capacidad de sintetizar diferentes factores de virulencia entre ellos el LPS, fimbrias, pilis, hematoxilina filamentosa y la cápsula. Diversos estudios experimentales han logrado demostrar una vía en la patogénesis de P. multocida en la cual utiliza el LPS, cuyas propiedades son brindarle a la bacteria la capacidad de reconocer y sobre todo adherirse a las superficies de las células hospederas. El ácido hialurónico (AH) es un glucosaminoglicano que presenta función estructural en los seres vivos, este polisacárido ha sido utilizado como método terapéutico en las enfermedades infecciosas del tracto respiratorio. En este estudio demostramos el efecto de animales expuestos a AH los cuales presentarón lesiones inflamatorias como engrosamiento del septo alveolar y focos de consolidación e infiltración de neutrófilos en cornetes nasales y pulmones, los animales expuestos a LPS y a AH presentarón aumento en la severidad de las lesiones inflamatorias y se presentarón cambios hemodinámicos como microtrombos, edema, congestión y hemorragia; esto quizas por las propiedades físicas del AH que dificultan su manejo haciendo que no inhiba la adherencia del LPS.

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Evaluación del efecto inhibitorio de N-glucosil aminoácidos sobre la adherencia ex vivo de P. multocida A al epitelio respiratorio de septo nasal de conejo
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Gallego López, Carolina | 2021-12-02

En este estudio se logró sisntetizar 6 N-glucopeptidos, los cuales llevan glucosa como carbohidrato principal acoplado a 6 aminoaciodos diferentes, mediante síntesis de Péptidos en Fase Sólida (SPPS-Fmoc/tBu) y usando el método de construcción por bloques aminoácido-monosacárido. Posteriormente se aisló P. multocida A cepa AUN001, obtenida de muestras de cornetes, tráquea y pulmones de conejos con signos de rinitis y neumonía procedentes de granjas de la Sabana de Bogotá (Colombia). El microorganismo se cultivó en agar infusión cerebro corazón, se seleccionaron las colonias de morfología redonda, de color gris, no hemolíticas. Bajo tinción de Gram se identificaron como cocobacilos, Gram negativos, bipolares y mediante pruebas bioquímicas eran catalasa y oxidasa positivas, no crecen en agar MacConkey, no hemolíticas, indol positivas, ureasa negativas, ornitina descarboxilasa positivas, glucosa positivas, lactosa negativas, sacarosa positivas, maltosa negativas, lo cual concuerda con previos reportes (Dziva, Muhairwa, Bisgaard, & Christensen, 2008). La identificación molecular se llevó a cabo mediante la amplificación del locus genético hyaD con los primers: F. 5' TGC CAA AAT CGC AGT CAG 3' and R. 5' TTG CCA TCA TTG TCA GTG 3' descritos previamente. Cada uno de los glicoconjugados se ensayó de manera individual en septos nasales de feto de conejo para comprobar su inocuidad, se utilizó el modelo ex vivo de cultivo de explantes de septo nasal de feto de conejo en donde los septos nasales estuvieron expuestos a cada glicoconjugado en una concentración de 250µg/200µL durante 2 horas; una vez concluido el experimento los septos fueron fijados en formol bufferado al 10%, teñidos con hematoxilina y eosina y evaluados para microscopia óptica de luz convencional, concluyendo que ninguno de los glicoconjugados inducia cambios microscópicos en los tejidos y que por lo tanto se consideraban inocuos y podían ser empleados en los siguientes experimentos. Posteriormente, se realizó incubación de la bacteria (1X108 UFC/ml ) con cada uno de los glicoconjugados sintetizados (250µg/200µL) durante 30 minutos a 37ºC, en atmosfera controlada con 5% de CO2; una vez concluido este tiempo, se expusieron los septos nasales de feto de conejo a la mezclas anteriormente descritas durante dos horas; terminado este tiempo los septos nasales fueron fijados en formol bufferado al 10%, teñidos con hematoxilina y eosina y evaluados para microscopia óptica de luz convencional, adicionalmente se realizó la técnica de inumoperoxidasa indirecta (IPI) con el fin de marcar P. multocida AUN001 y determinar su ubicación sobre los septos nasales experimentales. El procesamiento de la información se realizó a través del lenguaje de programación R (2021) haciendo uso de la interfaz RStudio (2021). Debido a que las variables de interés no superaron los supuestos de normalidad y homogeneidad de las varianzas, se realizó para la comparación entre efectos, la prueba de Kruskal Wallis y para comparar las medianas entre sí, se usó la prueba de Wilcoxon, ambas pruebas son no paramétricas y permiten verificar efectos medianos de los tratamientos o condiciones sobre la variable respuesta. Los resultados de este estudio demostraron que los glicoconjugados sintetizados se comportaron de manera similar entre si, pero si mostraron diferencias con respecto a los controles al inhibir de forma significativa pero parcial la adherencia de P. multocida A UN001 al epitelio respiratorio de los conejos y con ello igualmente se disminuyó parcialmente la intensidad de los cambios microscópicas evaluados.

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Intranasal instillation of Pasteurella multocida lipopolysaccharide in rabbits causes interstitial lung damage
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Patiño, Pilar | 2022

In order to characterize the in vivo lesions in the nasal cavities and lungs, twenty-eight rabbits were intranasally instilled with lipopolysaccharide (LPS) from P. multocida and then divided into seven groups according to euthanasia time. The nasal cavities and the lungs were processed for light microscopy, lectin histochemistry and transmission electron microscopy. Increased goblet cell activation and neutrophil infiltration were relevant changes in the nasal cavity. A predominantly interstitial pattern of diffuse alveolar damage and bronchopneumonic foci were the main lesions found in the lungs. LPS was found in the cytoplasm of ciliated cells, goblet cells, glandular cells, venular endothelial cells and neutrophils in the nasal cavity and in club cells, capillary endothelial cells and neutrophil in the lung. This study demonstrates that the LPS is able to cause lesions in the upper and lower respiratory tract, it binds to and is internalized by respiratory epithelial cells. Furthermore, it also traverses the intercellular spaces to reach the blood vessels, where it binds to and is internalized by neutrophil and red blood cells. These cells may then travel to the lungs where the LPS induces typical diffuse alveolar damage. This route of lung interstitial damage, to our knowledge, has not been described for this molecule or any known pathogen.

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Mecanismos de patogénesis bacteriana en procesos respiratorios: pasteurellosis
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Esquinas Castillo, Paula | 2007-01

Pasteurella multocida es un patógeno multiespecies que causa serias enfermedades en animales de producción, animales silvestres, de laboratorio y en los seres huma-nos. Esta bacteria es el agente etiológico de enferme-dades, como el cólera aviar en pollos y pavos, septicemia hemorrágica en bovinos, rinitis atrófica en cerdos e infecciones en humanos por mordeduras de gatos y de perros. Este agente es responsable por pérdidas anuales de cientos de millones de dólares en producción animal solo en Estados Unidos. En los conejos P. multocida pu-ede ser un patógeno virulento induciendo cuadros desde septicemia fatal, neumonía, rinitis crónica, otitis media, así como abscesos diseminados. En esta especie, se presenta un síndrome respiratorio, en el cual, frecuent-emente,, se aísla también Bortetella bronchiseptica, sin embargo aun no se ha determinado el papel que desempeña cada una de estas bacterias o algunos de sus factores de virulencia como el LPS en la inducción de la enfermedad. P. multocida es un cocobacilo Gram negativo donde se han identificado varios factores de virulencia, como la cápsula, la sialidasa, la hemagluti-nina filamentosa, la fimbria, la neuraminidasa, algunas porínas, la toxina dermonecrótica, la toxina termolabil (PMT), las proteínas de membrana externa (OMP) y el LPS. La falta de prevención eficaz y control de esta clase de enfermedades hace necesario la investigación de la patogénesis de este tipo de bacterias y sus interacciones con el hospedero.

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The effect of carbohydrates on the adherence of Pasteurella multocida to the nasal respiratory epithelium
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Gallego López, Carolina | 2021

Pasteurella multocida subsp. multocida is responsible for different diseases that generate great economic losses in farm animal. The effectiveness of immunization against those bacteria are variable and the use of antibiotics is questioned; for that reason, we investigated the potential inhibitory effect of different carbohydrates on the adherence in vivo of P. multocida to the rabbit respiratory epithelium as an alternative for the prevention of respiratory infections. Rabbits were intranasally and intratracheally inoculated with a solution containing 200 µl of 1x107 CFU of P. multocida that was previously mixed with 250 µg /200 µl of N-acetylglucosamine, alphamethylglucoside, alphamethylmannoside, N-acetylgalactosamine or sialic acid. The animals that received N-acetylglucosamine, alphamethylglucoside or alphamethylmannoside individually or a mixture of these three carbohydrates plus the bacterium, showed a signifi cant decrease (P <0.05) of the clinical symptoms, microscopic and macroscopic lesions in the nasal septa and in the lungs; also, the number of adhered bacteria to the nasal epithelium were also signifi cantly reduced. This research demonstrates for the fi rst time that such an approach could convert into a method for prevention of P. multocida infection in rabbits that is ecologically and economically safe and effective

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Ultrastructural Comparison of the Nasal Epithelia of Healthy and Naturally Affected Rabbits with Pasteurella multocida A
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Esquinas, Paula | 2013

An ultrastructural comparison between the nasal cavities of healthy rabbits and those suffering from two forms of spontaneous infection with Pasteurella multocida was undertaken. Twelve commercially produced rabbits of different ages and respiratory health status were divided into four groups: healthy from 0 to 21 days (G1, ); healthy from 23 to 49 days (G2, ); healthy from 51 to 69 days (G3, ); diseased rabbits with septicemia and the rhinitic form of P. multocida infection (G4, ). The main ultrastructural changes observed were a widening of the interepithelial spaces, increased activity and number of goblet cells, the formation of two types of vacuoles in epithelial cells, the degranulation and migration of heterophils between the epithelial cells, and the association of this migration with some of the other changes. No bacteria were observed adhering to the epithelium, and very few were observed free in the mucus. Scant inter-epithelial spaces were found in healthy rabbits, but they were not as large and numerous as those found in diseased animals. We discuss the origin and meaning of these changes but, we focus on the significance of the inter-epithelial spaces and goblet cells for the defense of the upper respiratory airways against the bacterium and its lipopolysaccharide.

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