Validación de pcr para detección de listeria monocytogenes en quesos frescos
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Sierra, Sara Cristina | 2004-07
Productos de alto consumo contaminados con Listeria monocytogenes como el queso fresco han sido reconocidos como ruta importante de transmisión de listeriosis, enfermedad que presenta altos índices de mortalidad, en particular sobre miembros vulnerables de la población tales como neonatos, ancianos y pacientes inmuno- suprimidos. Debido a que el método estándar utilizado para la identificación de este microorganismo es laborioso y consume gran cantidad de tiempo, se propuso la validación de la técnica Reacción en Cadena de la Poli- mersa (PCR) para la detección rápida, sensible y confiable de L. monocytogenes. La metodología propuesta implicó un procedimiento de extracción de ADN basado en la precipitación alcohólica en presencia de Mal (sal cao- trópica) que redujo en gran medida los compuestos inhibidores en la muestra, permitiendo la detección directa de I x 1 OsUFC de L. monocytogenes /g de queso. La PCR basada en la especificidad de los iniciadores Ll 1 y UI reconoció el género Listeria al amplificar un fragmento de 938pb del rADM 16S y los iniciadores LF y LR que reconocieron el gen hlyA, típico de la especie monocytogenes, amplificando una banda de 750pb. La reproducibi- lidad de la PCR reportó 97% de concordancia observada, sensibilidad del 96,3% y especificidad del 100%. La técnica "Gold Standard", también evaluada como técnica comparativa reportó 100% para todos los parámetros estadísticos evaluados. Los resultados de la PCR fueron evidenciados en cuatro horas, lo que demuestra la factibilidad de implementar la PCR para la detección de L. monocytogenes en la industria de alimentos.
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